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禽多杀性巴氏杆菌C481成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索

曹素芳， 黄青云， 韩先干， 邓宪方

（华南农业大学 兽医学院， 广东 广州 510642）

摘要： 应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C481成熟外膜蛋白H基因（ompmH），将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX6p1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游，获得了重组表达质粒pGEXompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21（DE3）,当转化菌的D600nm值达到0.6～0.8时，对异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GSTompmH表达的最适条件。结果，当细菌的D600nm值为0.6～0.8时，IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol/L，最佳诱导时间为4h，最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测，结果显示表达的融合蛋白GSTompmH能与C481外膜蛋白免疫血清发生特异性反应，证明pGEX6p1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。
关键词： 禽； 多杀性巴氏杆菌； 成熟外膜蛋白H基因； 聚丙烯酰胺凝胶电泳； 免疫印迹法； 融合蛋白
中图分类号：S 852.61  文献标识码： A  文章编号：1000-6419(2005)01-0045-04

Study on prokaryotic expression of mature outer membrane protein H gene of C481

CAO Sufang, HUANG Qingyun, HAN Xiangan, DENG Xianfang

(College of Veterinary, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)
Abstract: The mature outer membrane protein(ompmH) gene was amplifiedby PCR. According to the right open reading frame(ORF),the PCR product was cloned into the prokaryotic expression vector pGEX6p1 and obtained the recombinant plasmid pGEXompmH. The fused protein GSTompmH was studied in detail on many factors including IPTG inducing concentration, temperature and time. The expressed product was identified by SDSPAGE. The resltuts showed that the best concentration of IPTG was 0.8mmol/L and the best inducing time was 4h and the best inducing temperature was 25℃.The fusion protein GSTOmpmH could be recognized by antisera of C481 outer membrane protein using Western blotting. It was concluded that the fusion protein GSTOmpmH possessed good antigenicity.

Key words: avian; Pasteurella multocida; ompmH; SDSPAGE; Westernblotting; fusion protein

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